RECUENTO de RETICULOCITOS
Javier José Chávez Velásquez.
Alumno Tecnologia Medica UNMSM.
san_fernando5@hotmail.com

INTRODUCCION

Al perder el núcleo, el eritroblasto ortocromático se transforma en reticulocito, elemento anucleado, joven que todavía posee cierta capacidad de síntesis de RNA, proteínas y hemoglobina, gracias a la persistencia de algunas mitocondrias, ribosomas y restos de retículo endoplasmático, reconocibles mediante tinciones supravitales. Los reticulocitos miden entre 8-9 um aproximadamente. Se presentan en 4 estadios: I) en forma de ovillo II) formas reticulares incompletas III)formas reticulares completas y IV) granular-filamentosa. Los estadios III y IV, dan cuenta del 90% de los casos, vistos en sangre periférica.

El retículocito permanece algunos días en la médula ósea pasando luego a la sangre periférica donde persiste 24 horas, finalizando su maduración. El recuento de reticulocitos mide la capacidad de regeneración eritrocitaria.

Para identificarlos, se emplea el azul brillante de cresilo, un colorante básico perteneciente al grupo de las oxacinas (CI.51010). Fórmula: C17H20ClN3O M.=317,79, que tiene gran afinidad por los ácidos nucleicos. Es un colorante supravital que se emplea para colorear sangre y poner en evidencia reticulocitos y plaquetas.

Preparación de solucciones madre y de rutina:

a)Azul brillante de cresilo, CLZn, solucción doble 25 g. Preparación de solucción madre primaria: Se agrega 1,5 g de este polvo a 100 ml de solucción isotónica (NaCl, 0, 85%), filtrar y mantener entre 15-25 C. Si no es contaminada por gérmenes, dura 1 año.

b) Solucción de rutina: Diluir 5 ml (1/80-1/200), de solucción primaria, con solucción isotónica de NaCl.

-Método
-Mezclar dos gotas (20 ul), del colorante con 20 ul de sangre en un tubo. Si el hematocrito es bajo, anadir mas sangre y si es alto, solo 20 ul.
-Mezclar e incubar durante 20 minutos en baño maria, en estufa a 37 C o frotarlo con un reborde de las manos. Agitar para resuspender los hematíes.
-Colocar una gota sobre el portaobjetos y hacer el frotis. Dejar secar y leer a 1000 aumentos con aceite de inmersión. VN: Adultos:5-15% (25 000-75 000/ul). Niños: 20-60%(100 000-300 000/ul).

RECUENTO

Para ambos métodos se cuentan los reticulocitos identificados sobre un fondo de 1000 hematíes bajo aceite de inmersión. El porcenaje de reticulocitos existentes, es calcuadomediante una regla de 3.

Para optimizar los resultados se calcula el indice eritrocitario en funcion del hematocrito :

Indice eritrocitario = % reticulocitos x Hto paciente/
Constante x Hto normal

VALORES REFERENCIALES
0.5 - 1.5% en adultos
2 a 6% recién nacidos

CAUSAS DE AUMENTO
· Eritroblastosis fetal
· Anemia hemolítica
· Post-hemorragia
· Enfermedad renal con aumento de producción de eritropoyetina

CAUSAS DE DEFICIT
Insuficiencia de la medula osea
Cirrosis hepática
Deficiencia de folato
Deficiencia de hierro
Radioterapia
Deficiencia de vitamina B12
Enfermedad renal con disminución en la producción de eritropoyetina

CAUSAS DE ERROR
Recuento insuficiente de hematíes y reticulocitos
La hemoglobina H se desnaturaliza por el azul brillante y aparece en forma de inclusiones redondeadas azul verdosas
No debe leerse después de 3 horas de incubación
La prescripción debe hacerse tras un estudio racional de los datos del hemograma

CONSIDERACIONES GENERALES
· El reticulocito puede ser abundante o escaso según su estadio evolutivo y presentar aspecto grosero o fino dependiendo de la intensidad o, pH de la tinción utilizada, la rapidez del fijador y la composición del fijador .

. Colorante precipitado. En este caso hay que filtrar la solucción.
· El reticulocito se tiñe pobremente o no se tiñe cuando existe concentraciones muy elevadas de glucosa.

· Los reticulocitos mas maduros (grupo IV) presentan los mayores problemas técnicos a la hora de identificación
· El grado de reticuloctosis es proporcional a la gravedad de la anemia.

Reticulocitos en Contadores Coulter:

Son superiores a los métodos manuales. Cuentan 32 000 reticulocitos por vez, emplean azul de metileno (precipita ARN y complejos ribosómicos) y variadas metodologias :impedancia,conductividad y dispersión de luz laser.